Анализ пцр на гепатит

    0
    24

    ПЦР анализ

    Анализ пцр на гепатитАнализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С ), часто называемый анализ ПЦР гепатита С — это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.

    Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

    Стоимость пцр

    ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб. выполняется от одних суток до недели.

    Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

    Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

    Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

    Анализ пцр на гепатит

    Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 10 6 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 10 5 МЕ/мл = 2.2* 10 6 копий/мл.

    Важно знать, что не существует прямой связи между концентрацией вируса в крови и тяжестью гепатита С.

    На что же влияет вирусная нагрузка?

    Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

    Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

    Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*10 4 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*10 7 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

    Как часто нужно делать количественный тест?

    Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

    Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

    Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

    Рис.2Пример результатов количественного теста.Анализ пцр на гепатит

    Что такое ПЦР анализ и вирусная нагрузка?

    Анализ пцр на гепатит

    Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это лабораторный метод определения ДНК и РНК. Впервые он был опробован почти полвека назад американцем Кэри Муллисом. Этот сверхчувствительный анализ способен определить носителя генома по одной исходной молекуле, содержащейся в крови, слюне или коже.

    Метод ПЦР имеет огромные перспективы, находит применение не только в медицине, но и в генной инженерии, и в криминалистике. С его помощью клонируют и создают новые виды ДНК, определяют степень родства. По кусочку эпителия, найденного на месте преступления, устанавливают преступника.

    Анализ ПЦР на гепатит – что это и зачем делают?

    Почему необходим анализ ПЦР при подозрении на гепатит С, что это такое?

    Анализ пцр на гепатит

    Вирус гепатита С – РНК содержащий вирус, имеет 6 генотипов и до 500 субтипов. Из всех гепатитов этот вирус обладает самой высокой мутационной способностью и преодолевает защитный барьер иммунной системы. Из общего числа заболевших гепатитами, вирус С стал причиной 70% случаев хронической формы и 30% цирроза и рака печени.

    Для справки! Диагностика гепатита С, опасного вирусного заболевания печени, стала возможной после внедрения в клиническую практику анализов с помощью ПЦР. До этого времени вирус оставался «невидимым» для исследователей, не реагируя на обычные методы определения инфекции.

    Суть способа: часть исследуемого гена с помощью специальных ферментов и условий заставляют размножаться в пробирке. Анализ ПЦР позволяет определить штамм вируса, без которого невозможно провести результативное лечение: каждый генотип по-разному чувствителен к антивирусным препаратам. Применяется два типа ПЦР:

    Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.

    Качественный и количественный ПЦР

    ПЦР качественный на гепатит С дает ответ: есть ли в крови пациента штамм вируса С и какой именно. Генотипирование необходимо для уточнения диагноза, прогноза заболевания и определения сроков лечения.

    Анализ пцр на гепатит

    По принятой классификации ген обозначается числом, а подтип маленькой латинской буквой.

    Расшифровка таблицы генотипов вируса С:

    • Генотип 1а, 1b, 1с
    • Генотип 2а, 2b, 2с, 2 d
    • Генотип 3а, 3b, 3с, 3d, 3e, 3f
    • Генотип 4а, 4b, 4с, 4d, 4e, 4f, 4g, 4 h, 4 i, 4 j
    • Генотип 5 а
    • Генотип 6 а

    Самые распространенные генотипы 1,2,3. В России чаще всего встречаются 1а, 1b, 2 и 3 штаммы вируса С.

    Генотип вируса 1b труднее других поддается лечению, в 90% переходит в хроническую форму, из которых 30% перерождаются в рак или цирроз печени.

    Генотипы 2а и 3а имеют степень хронизации 33-50 %, более отзывчивы на противовирусную терапию.

    При подтверждении присутствия вируса проводится ПЦР количественный на гепатит С, с помощью которого рассчитывают количество молекул РНК, находящихся в лабораторном образце больного.

    Расшифровка анализа

    Качественный ПЦР анализ имеет два ответа:

    ПЦР отрицательный означает, что возбудитель в образцах крови не обнаружен.
    Положительный ответ свидетельствует об обратном: обнаружены РНК того или иного генотипа вируса С.

    Анализ пцр на гепатит

    Вероятность достоверности результата равна 95%. Остальные 5% — это ошибка по вине человека. Такая возможность допускается из-за высоких требований к проведению исследования:

    • правил хранения реактивов;
    • соответствующей квалификации медперсонала;
    • чистоты биоматериала.

    Сам набор ПЦР имеет 100% диагностическую точность.

    Количественный ПЦР РНК гепатита С позволяет определить вирусную нагрузку на организм больного. С его помощью:

    • уточняется стадия заболевания (острая, хроническая);
    • определяется эффективность противовирусного лечения;
    • выясняется необходимость биопсии печени.

    Анализ пцр на гепатит

    В некоторых случаях больной не ощущает никаких признаков болезни, в то время как методом ПЦР установлено инфицирование ВГС. Это означает, что заболевание находится на ранней стадии развития либо в хронической форме. Для уточнения диагноза необходимы дополнительные исследования, для скорейшего начала противовирусного лечения.

    Вирусная нагрузка при гепатите С

    Вирусная нагрузка показывает активность печеночного вируса, насколько активно происходит его размножение.

    ПЦР количественный гепатита С измеряется в Международных Единицах на 1 мл или МЕ/мл, что означает, сколько в 1 мл исследуемой крови обнаружено копий рибонуклеиновой кислоты определенного штамма вируса С.

    Какая считается высокой, какая низкой?

    Анализ на вирусную нагрузку позволяет определить наличие вирусных РНК в концентрации 50 МЕ/мл. Вирусная нагрузка в норме это когда ПЦР не обнаружено ни одной молекулы РНК ВГС.

    Анализ пцр на гепатит

    Таблица вирусной нагрузки:

    • низкая – концентрация от 600 МЕ/мл 3*104 МЕ/мл;
    • средняя – концентрация от 3*104 МЕ/мл до 8*105МЕмл;
    • высокая – уровень более 8*105 МЕ/мл.

    Низкая вирусная нагрузка – это сигнал, что терапевтическое лечение подобрано правильно, и прогноз на излечение от гепатита С – благоприятный.

    Высокая концентрация вирусных клеток свидетельствует, что болезнь находится в острой фазе. Кровь пациента является опасным источником инфекции.

    Вирусная нагрузка, показатели которой находятся на среднем уровне, характеризует либо хроническую стадию ГВС, либо может иметь два тренда развития: к ее повышению или понижению.

    Внимание! Количественное тестирование проводится на протяжении всей антивирусной терапии: через 4, 12 и 24 недели, цель которой – снизить вирусную нагрузку.

    По ее окончании – через 6 месяцев делается контрольная ПЦР.

    Стоимость ПЦР диагностики

    Для справки! Пройти диагностику на гепатит С или любое другое инфекционное заболевание можно по направлению врача или самостоятельно.

    Поводом для беспокойства должны стать следующие симптомы:

    • общая слабость;
    • изменение цвета кожи, глазных склер, выделений;
    • тошнота;
    • снижение аппетита;
    • боли в мышцах и суставах;
    • тяжесть в правом подреберье;
    • повышенный уровень в крови АСТ и АЛТ.

    Анализ пцр на гепатит

    При контакте с инфицированными больными, в предоперационный период, при гемодиализе также рекомендовано обследование.

    Государственные клиники делают анализ крови на ПЦР бесплатно, если имеется направление от инфекциониста или гепатолога.

    Платные услуги по ПЦР диагностике оказывают во всех крупных российских городах. Стоимость зависит от типа теста, имеющегося оборудования, сроков проведения и других факторов.

    Качественный ПЦР анализ в Москве и С-Петербурге обойдется от 600 до 900 руб. В регионах – от 300 до 800 руб.

    Определение вирусной нагрузки гепатита С будет стоить 17000-22000 руб. Для прочих видов инфекции цена количественного исследования: 1200-10000 руб.

    Достоинства и недостатки метода ПЦР

    В чем преимущества метода полимеразной цепной реакции перед другими диагностическими способами?

    Анализ пцр на гепатит

    1. Широкий спектр применения. С помощью ПЦР, используя типовое оборудование, можно определить любой вирус.
    2. Точность определения возбудителя. Применяя различные комбинации ферментов и технику проведения анализа, достигается 100% спецификация исследования для обозначенной инфекции.
    3. Высокая чувствительность. Методика позволяет выявить присутствие в крови одной молекулы вируса.
    4. Оперативность. Качественный анализ бывает готов через несколько часов, количественный – через двое суток.
    5. Диагностика вируса в инкубационном периоде. При ПЦР возбудитель определяется не по наличию антител, когда уже имеется иммунная реакция организма, а до начала патологического процесса, что облегчает лечение.

    Недостатки ПЦР являются следствием ее достоинств:

    • для чистоты анализа требуется высочайшая степень чистоты. в том числе воздуха в лаборатории, чтобы «чужие» ДНК не попали в исследуемый образец;
    • высокие требования к персоналу. осуществляющему забор и анализ биоматериала.

    Важно! Оценку полученным результатам должен делать лечащий врач, умеющий отделить подлинный анализ от ложноположительного (когда лечение уже закончено, но в крови остается нежизнеспособный вирус) и ложноотрицательного (когда при клинической картине вирус не обнаружен).

    Еще материалы по теме:

    Диагностика гепатита C с помощью ПЦР-исследования

    Полимеразная цепная реакция (ПЦР) все чаще находит применение в клинической практике для определения причин возникновения различных вирусных заболеваний, в том числе для диагностики вирусного гепатита С .

    Для его диагностики активно применяют ПЦР в различных ее модификациях. С помощью ПЦР на гепатит С возможно установить факт наличия в крови пациента РНК вируса гепатита С и точно поставить диагноз.

    Для лечения и чистки ПЕЧЕНИ наши читатели успешно используют метод Елены Малышевой. Внимательно изучив этот метод мы решили предложить его и вашему вниманию.

    Вариации анализа

    Методика ПЦР стала доступна врачам несколько десятилетий назад. Она основана на множественном копировании определенного фрагмента вирусной или бактериальной РНК или ДНК, с последующей детекций (распознаванием данного фрагмента) в сыворотке крови пациента.

    Анализ пцр на гепатитПри этом существует два принципиально отличающихся метода ПЦР-исследования: количественный и качественный.

    Качественный метод позволяет только ответить на вопрос: имеется ли в биологическом материале (сыворотка крови, слюна, семенная жидкость и т. д.) генетический материал определенного вируса?

    Количественный метод, в свою очередь, позволяет определить количество этого генетического материала, что необходимо в ряде случаев для определения стадии заболевания или оценки эффективности терапии.

    Качественный вариант ПЦР при заболевании

    Использование качественного варианта ПЦР-анализа при данном заболевании позволяет обнаружить факт присутствия РНК вирусного гепатита С в биологических жидкостях (сыворотка крови, слюна и т. д.) больного. При этом результат анализа может быть только двух видов: положительный или отрицательный. Очень важна в этом случае его правильная расшифровка.

    • Анализ пцр на гепатитположительный результат при определении РНК вирусного гепатита С говорит врачу о том, что в исследуемой биологической жидкости находится РНК данного вируса. Соответственно, пациент инфицирован им, а, значит, возможна постановка диагноза вирусного гепатита С. Однако всегда стоит помнить о возможности возникновения ложных положительных результатов анализа;
    • отрицательный результат ПЦР-анализа свидетельствует об отсутствии РНК вируса гепатита С в исследуемой биологической жидкости, или же, содержание молекул РНК в исследуемой жидкости было слишком мало и располагалось ниже границы чувствительности ПЦР-метода. Отрицательный результат анализа не всегда может указывать на отсутствие вируса в крови. Возможность ложных отрицательных результатов анализа должна всегда учитываться лечащим врачом.

    При развитии острой формы заболевания гепатита С проведение качественного ПЦР-исследования позволяет установить факт заболевания уже через 1-3 недели после попадания вируса в организм человека.

    Ложные отрицательные результаты могут появиться в результате:

    • Анализ пцр на гепатитпопадания в биологический материал (кровь) загрязняющих субстанций;
    • использование Гепарина для предотвращения свертывания крови в пробирке или его применение пациентом;
    • попадание в исследуемый материал веществ из окружающей среды, блокирующих ферменты, используемые в ПЦР.

    Пациент не должен соблюдать специальных рекомендаций перед проведением качественного метода ПЦР-диагностики. Для этого необходимо только взять кровь из вены пациента на анализ.

    Количественный вариант ПЦР

    Использование количественного анализа ПЦР позволяет определить не только сам факт присутствия вируса в крови, но и количество вирусных частиц в любой биологической жидкости (так называемую вирусную нагрузку). С помощью данной разновидности ПЦР можно определить число копий РНК вируса гепатита С, которые циркулируют в определенном объеме.

    Результат данного типа ПЦР выражается в числовых значениях, где единицей измерения является международные единицы на миллилитр – МЕ/мл.

    Анализ пцр на гепатитПроведение подобной разновидности ПЦР-диагностики используется в определенные сутки лечения вирусного гепатита С. Первое определение вирусной нагрузки происходит при поступлении больного человека в больницу. В дальнейшем анализ проводят на 1-ой, 4-ой, 12-ой и 24-ой неделях с начала применения лекарственных средств. Уже на 12-ой неделе можно сказать, эффективна терапия или нет.

    Анализ пцр на гепатит Поразительное открытие в лечении ПЕЧЕНИ! Елена Малышева! Чтобы восстановить функции печени просто нужно … Сайт Елены Малышевой Интервью Лечение malisheva.ru

    Анализ пцр на гепатит Как я полностью вылечила и восстановила печень! Реальная история от Алевтины Тетьяковой Моя жизнь История лечения tretyakova.ru

    Анализ пцр на гепатит Врачи ошарашены! Эффективный способ в восстановлении ПЕЧЕНИ Для ЛЕЧЕНИЯ ПЕЧЕНИ нужно каждый день … Сайт Елены Малышевой Интервью с врачом pechenzdorova.ru

    Специально подготавливать пациента к проведению исследования не требуется. Рекомендуется не курить в день сдачи анализа. В качестве исследуемого материала используют кровь из вены.

    После того как была проведена количественная ПЦР, необходимо произвести расшифровку полученных результатов. Понятия «норма» в подобных случаях не существует. Для расшифровки применяется специально разработанная градация показателей:

    • Анализ пцр на гепатит результат исследования: не обнаружено – РНК вирусного гепатита С в венозной крови пациента не выявлена (результат отрицательный), или же она содержится в очень низком количестве, не позволяющем методу ее определить (<40 ME/мл – порог чувствительности количественного ПЦР);
    • результат исследования: <8*10 5 МE/мл – положительный результат теста. Такой уровень вирусной нагрузки очень низкий. Является показателем эффективности терапии и благополучного течения заболевания;
    • результат исследования: >8*10 5 МE/мл – положительный результат теста. Уровень нагрузки очень высокий. Плохой прогноз течения заболевания и необходимость коррекции или замены используемых лекарственных средств.

    Важно запомнить, что полученный уровень вирусной нагрузки не отражает тяжесть течения патологии и степень разрушения печени. Для этого существуют другие методы биохимических исследований. Для правильного подбора методов лечения необходимо знать генотип вируса гепатита С.

    Что же показывает вирусная нагрузка:

    1. Высокий уровень концентрации вирусных частиц в биологических жидкостях, а особенно в крови, связан с высоким риском передачи вируса при половых контактах или во время беременности от матери плоду.
    2. Количество вирусных частиц является отражением эффективности применяемых лекарственных средств и позволяет рационально выбирать препараты и используемые дозы.

    Ультрачувствительный метод ПЦР диагностики

    На сегодняшний день можно пройти так называемую ультра ПЦР на определение вируса гепатита С. Полностью этот метод называется ПЦР с гибридизационно-флуоресцентным исследованием в режиме реального времени.

    Многие наши читатели для лечения и чистки печени активно применяют широко известную методику на основе натуральных ингредиентов, открытую Еленой Малышевой. Советуем обязательно ознакомиться.

    Когда показана ультра ПЦР:

    1. В случаях подозрения на вирусный гепатит С у пациентов со скрытыми формами заболевания.
    2. В случаях наличия у больного антител к вирусу гепатита С, но не подтвержденных ПЦР-диагностикой.
    3. Для оценки эффективности проводимого лечения и подтверждения факта выздоровления.
    4. В качестве скрининговой методики для раннего выявления заболевания у людей в популяции.

    Анализ пцр на гепатитДля проведения исследования, как правило, используется венозная кровь пациента. Чувствительность ультра метода менее 10 МЕ/л, что в несколько раз выше, чем у стандартных количественных и качественных вариантов ПЦР-диагностики. Назначением ультра ПЦР занимается врач-инфекционист или врач-гепатолог.

    Решающим этапом постановки диагноза и оценки лечения, является правильная расшифровка полученных результатов при ультра методе ПЦР. Всегда стоит помнить о том, что существует небольшая вероятность получения ложных отрицательных и ложных положительных результатов.

    Для устранения подобных ситуаций, необходимо исключить загрязнение образцов крови и лабораторных материалов. С помощью применения ультра ПЦР возможно избежать ситуаций, которые приводят к ложным отрицательным результатам, и тем самым усложняют диагностику.

    Анализ пцр на гепатит

    Анализ пцр на гепатит

    Анализ пцр на гепатит

    Анализ пцр на гепатит

    Анализ пцр на гепатит

    Анализ пцр на гепатит

    Вам все еще кажется, что победить Гепатит С невозможно?

    Судя по тому, что вы сейчас читаете эти строки — победа в борьбе с Гепатитом С пока не на вашей стороне.

    И вы уже принимали токсичные препараты, у которых было куча побочек? Оно и понятно, ведь игнорирования болезни, может привести к тяжелым последствиям. Усталость, потеря веса, тошнота и рвота, желтоватый или сероватый оттенок кожи, горечь во рту, ломота в теле и в суставах. Все эти симптомы знакомы вам не понаслышке?

    Эффективное средство от Гепатита С существует. Перейдите по ссылке и узнайте, как вылечила Гепатит С у себя Ольга Сергеева.

    Источники: http://www.hv-info.ru/gepatit-s/analizy/pcr.html, http://zapechen.ru/bolezni-pecheni/gepatit/c/ptsr-analiz.html, http://vsepropechen.ru/bolezni/gepatit/vidy/c/analiz-pcr-na-gepatit-c.html

    ОСТАВЬТЕ ОТВЕТ

    Please enter your comment!
    Please enter your name here